實驗周期:4-6 weeks
建模方法:
主要試劑: 紅金龍香煙(湖北中煙工業有限責任公司生產,烤煙型,每支含焦油量9mg、煙氣煙堿量0.7mg、煙氣一氧化碳量12mg),脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,美國Sigma公司),TNF-alpha和IL-18 ELISA試劑盒cloud-clone公司)。
建模方式:SPF小鼠,適應性飼養1周,采用鼻腔滴入LPS加熏香煙的方法建立COPD小鼠動物模型分別于第1、29經鼻腔滴入LPS(30μg/6μL),第2-30天(除第29天)采取熏香煙法,將小鼠放入自制的玻璃熏箱,10支/次,30min/次,5d/周,共4周。
模型評價
一般觀察:一般情況空白對照組小鼠無死亡,毛發光澤,呼吸均勻,活動正常;模型對照組小鼠毛發無光澤,部分有脫毛現象,躁動,熏煙時喜扎堆,倦怠蜷縮,汗出,腹部脹大,呼吸急促,出現點頭運動,甚者張口呼吸明顯。
小鼠肺功能檢測看小鼠氣道阻力、動態肺順應性、最大呼氣流量、吸氣時間、呼氣時間、
組織病理學
肺組織形態學檢測:
腹腔麻醉小鼠后,開胸暴露胸腔:取左側肺葉固定于10%甲醛溶液24h,常規脫水石蠟包埋,切片行HE染色,光鏡下觀察。
空白對照組小鼠肺泡結構清晰,肺泡大小均勻,氣道黏膜上皮結構完整,纖毛排列整齊;模型對照組小鼠部分肺泡壁塌陷,肺泡不規則擴大并相互融合,形成肺大泡,肺間質內可見不同程度的炎性細胞浸潤,支氣管黏膜上皮脫落,黏膜皺襞增多,突入管腔,纖毛黏縮,管腔變窄,符合COPD病理改變。
標志因子水平
TNF alpha、Il-18檢測:
最后一次煙熏完后24小時內處死,按0.05mL/10g)腹腔麻醉小鼠,將小鼠腹主動脈取血法取血1mL,室溫下放置2h后,2 000r/min離心20min,取血清,-20℃保存備用。按ELISA試劑盒操作步驟說明檢測小鼠血清中TNFalpha、