1. 雄性C57BL/6小鼠,10周齡。
2. 小鼠適應性飼養一周后,行左頸總動脈和右腎動脈結扎術。
3. 常規麻醉消毒后,分離左側頸總動脈進行結扎,然后縫合頸部皮膚。
4. 腹部右側消毒后,分離右腎動脈進行結扎,然后關腹;待小鼠蘇醒后放回飼養籠繼續飼養。
7. 一周后,麻醉小鼠,固定在立體定位儀上,暴露顱骨,確認Bregma點。
8. 在Bregma點前1.2mm、右側0.7mm的位點轉孔,顱平面下深度4.7mm的位置注射彈性蛋白酶到大腦基底池。
9. 彈性蛋白酶以0.5μl/min的速度,注射2.5μl(35mU),停針10min。
10. 彈性蛋白酶注射后,縫合小鼠皮膚。
11. 將預先充好血管緊張素的微滲透泵埋置在小鼠背部皮下。
12. 微滲透泵速度1000ng/kg/min 。
13. 每日監測小鼠的神經癥狀,如小鼠出現不活動、癱瘓、體重≥15%的降低,立即終止實驗,檢查大腦顱底Willis血管環。
14. 實驗的第21天,所有小鼠心臟灌注3ml 4%的多聚甲醛,隨后溴酚藍明膠溶液心臟灌注,體視鏡下檢查大腦顱底Willis血管環附近顱動脈瘤形成及破裂情況。
15. 小鼠顱底拍照示顱內動脈瘤形成情況。