HE染色實驗是生物醫學中常用的一種染色技術,尤其在病理學、組織學和胚胎學等領域具有廣泛應用。其HE染色通過利用蘇木精和伊紅兩種染料的酸堿性質,將組織切片中的細胞核和細胞質分別染成藍色和紅色,從而清晰地顯示出組織或細胞的形態結構。蘇木精是一種堿性染料,能將細胞核內的染色質和胞質內的核酸染成藍紫色;而伊紅是一種酸性染料,能使細胞質和細胞外基質中的成分染成紅色。這種染色方法不僅簡單易行,而且染色效果穩定,適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色,可長期保存。
HE染色實驗的步驟主要包括脫蠟、染色、脫水和封片等環節。下面將詳細介紹這些步驟:
1、樣品制備
固定:對于貼壁生長細胞,胰酶消化后調整細胞濃度并滴加于蓋玻片上,培養相應時間后取出細胞爬片,用PBS洗滌。
固定液處理:使用95%乙醇固定20分鐘,然后用PBS洗滌。
2、蘇木素染細胞核
染色:切片入Harris蘇木素染液中染色3-8分鐘,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數秒,自來水沖洗,0.6%氨水返藍,流水沖洗。
分色:若細胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數秒,自來水洗滌。
3、伊紅染細胞質
染色:切片入伊紅染液中染色1-3分鐘。
4、脫水封片
脫水:將切片依次放入95%酒精I 5分鐘-95%酒精II 5分鐘-無水乙醇Ⅰ5分鐘-無水乙醇Ⅱ5分鐘-二甲苯Ⅰ5分鐘-二甲苯Ⅱ5分鐘中脫水透明,從二甲苯拿出來稍晾干。
封片:中性樹膠封片。
5、顯微鏡鏡檢
圖像采集分析:在顯微鏡下觀察染色結果,并進行圖像采集和分析。