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Elisa檢測技術實驗步驟
ELISA(酶聯免疫吸附測定)是一種常用的免疫分析技術,用于檢測抗原或抗體的存在和濃度。以下是進行Elisa檢測的基本步驟:
1.準備材料和試劑:確保所有必需的試劑和材料都已準備就緒,包括酶標抗體、固相載體(如微孔板)、洗滌液、底物和終止液。
2.包被微孔板:將特定的抗體或抗原固定在微孔板的孔內,通常通過在孔中加入包被緩沖液和目標蛋白進行過夜孵育實現。
3.封閉非特異位點:使用封閉液(如BSA或脫脂牛奶)處理微孔板,以減少非特異性結合。
4.添加樣本和標準品:向微孔板中加入待測樣本和一系列已知濃度的標準品,進行孵育以允許抗原或抗體與其對應的結合伴侶結合。
5.添加酶標抗體:加入與目標抗原或抗體特異性結合的酶標抗體,并孵育以形成酶標記的免疫復合物。
6.洗滌:使用洗滌液去除未結合的酶標抗體,這是減少背景信號和提高檢測靈敏度的關鍵步驟。
7.添加底物:加入酶底物,底物在酶的作用下發生顏色反應。
8.終止反應:加入終止液停止顏色反應的發展。
9.讀取吸光度:使用酶標儀在特定波長(通常是450 nm)下測量各孔的吸光度,根據標準曲線計算樣本中目標分子的濃度。
10.數據分析:根據標準曲線繪制樣本的濃度,并進行必要的統計分析。
在進行 Elisa檢測技術實驗時,應嚴格遵守實驗操作規程,確保實驗的準確性和重復性。實驗中的每個步驟都可能影響最終結果,因此需要仔細控制實驗條件,如溫度、
孵育時間和洗滌次數.
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