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Fluoro-Jade C染色實驗
Fluoro-Jade C染色是一種用于檢測所有退化成熟神經元的熒光染色技術,包括凋亡、壞死和自噬細胞。FJC染色不依賴于細胞死亡的具體機制,因此可以用于多種
神經退行性疾病模型和腦損傷研究中。FJC染色具有高信號背景比和高分辨率,能夠定位神經細胞體的退化以及遠端樹突、軸突和末端。
Fluoro-Jade C染色實驗步驟
1.組織切片:首先,將固定的組織切片成適當厚度。
2.脫水和透明化:使用乙醇系列和二甲苯等試劑對組織切片進行脫水和透明化處理。
3.染色:將切片浸入FJC染色溶液中,通常在室溫下孵育數小時至過夜。
4.清洗:使用蒸餾水或PBS輕輕清洗切片,以去除未結合的染料。
5.干燥:將切片在室溫下自然干燥或使用空氣吹干。
6.封片:使用抗褪色劑(如DAPI)和封片劑封片,準備顯微鏡觀察。
7.顯微鏡觀察:在熒光顯微鏡下觀察FJC的綠色熒光,以識別退化的神經元。
注意事項和優化建議
1.在染色過程中,應嚴格按照制造商的說明進行,以確保染色效果。
2.FJC染色后的切片應避免長時間暴露在強光下,以減少熒光淬滅。
3.根據新的研究,FJC染色可能不是特異于退化的成熟神經元,有時也可以標記非神經細胞,如激活的星形膠質細胞和微膠質細胞。因此,在解釋實驗結果時,
應考慮這些可能的非特異性標記。
4.為了提高實驗的準確性,可以結合使用其他免疫熒光標記來鑒定特定類型的細胞。
請根據您的具體實驗條件調整上述步驟,并在實驗過程中遵循實驗室安全規程。
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