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ELASA:用于檢測未知抗體的間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。2.次日洗滌3次。3.加稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。4.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。5.終止反應(yīng):于各...
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一、服務(wù)介紹免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是指利用抗體與抗原間的特異性結(jié)合特性,將抗原(我們感興趣的靶蛋白)-抗體復(fù)合物從樣品中分離出來,達(dá)到初步分離純化靶蛋白的目的。之后,樣品可以再進(jìn)行Westernblot分析。二、實(shí)驗(yàn)原理免疫沉淀是利用抗原與抗體免疫反應(yīng)達(dá)到純化,定性檢測蛋白的目的,即在蛋白質(zhì)提取液中加入與抗原(靶蛋白質(zhì))特異性結(jié)合的抗體,抗體與抗原結(jié)合后形成免疫復(fù)合物,再與蛋ProteinA/G或二抗偶聯(lián)的瓊脂糖珠子孵育,通過離心得到免疫復(fù)合...
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目的無菌大鼠的培育中,出生后飼喂的人工配制乳對(duì)于無菌大鼠的培養(yǎng)至關(guān)重要。深度水解蛋白的無乳糖奶粉,便于嬰幼兒吸收,減少了各種消化不良和過敏反應(yīng),那么在無菌大鼠使用的奶中加入這種奶粉是否會(huì)對(duì)無菌大鼠的培育有積極的作用,并且檢測飼養(yǎng)成功的無菌大鼠的生化指標(biāo)。方法使用清潔級(jí)的SD大鼠,確定臨產(chǎn)期,摘除*宮后,在隔離器內(nèi)剝離大鼠幼崽,使用人工方法哺乳至22d離乳,記錄體重和生存率。使用的配方奶中,加入深度水解蛋白無乳糖奶粉的為實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組中加入全價(jià)配方奶粉。對(duì)培育成功的無菌大鼠在第...
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目的觀察皮下注射不同天數(shù)異丙腎上腺素(1mg/kg體質(zhì)量)誘發(fā)大鼠特異性心肌病所引起心肌組織切片HE染色、VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)、FCF(成纖維細(xì)胞生長因子)表達(dá)及心電圖T波的變化。方法除空白組外各組大鼠皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素(1mg/kg),分別為連續(xù)皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素(1mg/kg)2d組、連續(xù)皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素(1mg/kg)4d組、連續(xù)皮下多點(diǎn)注射異丙腎上腺素(1mg/kg)6d組。給藥1周后,大鼠麻醉,測心電圖,取心臟,采用HE染色觀察大鼠心肌細(xì)...
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目的建立SpragueDawley(SD)大鼠的正常膝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)方法及脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)誘導(dǎo)成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-likesynoviocytes,FLS)炎癥模型。方法選取80~120gSPF級(jí)幼年SD大鼠,分離其滑膜組織,原代培養(yǎng)至第3代,用組織化學(xué)染色法和EdU法檢測FLS蛋白標(biāo)志物vimentin和增殖功能。同時(shí),用滑膜組織作對(duì)照,檢測第3代至第8代原代培養(yǎng)FLS的特征蛋白表達(dá),篩選具有生理功能的高純度...
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目的:通過煙熏法、蛋白酶滴注及兩者相結(jié)合的方法構(gòu)建大鼠慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD)模型,并從炎癥水平、影像及病理等方面評(píng)價(jià)造模效果,對(duì)三種建模方法進(jìn)行比較。方法使用煙熏、蛋白酶滴注及兩者相結(jié)合的方法進(jìn)行COPD大鼠造模,每組大鼠分別為60只、30只、30只,同時(shí)設(shè)置對(duì)照組20只。每周對(duì)大鼠進(jìn)行體重測量。煙熏組及對(duì)照組大鼠于造模24h,1、2、4、8、12、16、20、24周,蛋白酶組及蛋白酶+煙熏組大鼠于造...
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動(dòng)物試驗(yàn)(又名動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或者動(dòng)物研究),當(dāng)今有爭議的話題之一,是指在科學(xué)研究中使用動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。雖然使用動(dòng)物來研究人類成為流行是在1859年查爾斯.達(dá)爾文提出進(jìn)化論之后,但是文獻(xiàn)記載早在公元前4世紀(jì),希臘杰出古典哲學(xué)家亞里士多德就已經(jīng)開始使用活體動(dòng)物做試驗(yàn)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(AnimalExperiment)指在實(shí)驗(yàn)室內(nèi),為了獲得有關(guān)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等方面的新知識(shí)或解決具體問題而使用動(dòng)物進(jìn)行的科學(xué)研究。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必須由經(jīng)過培訓(xùn)的、具備研究學(xué)位或?qū)I(yè)技術(shù)能力的人員進(jìn)行或在其指導(dǎo)下進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物...
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