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熒光素酶報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測定儀（化學發光儀）測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。雙熒光素酶體系，即有兩種熒光素酶，比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火...

【實驗方法與步驟】（1）細胞凋亡的誘導：HeLa細胞常規傳代培養至對數生長期(見細胞傳代培養）。實驗組細胞加入順鉑溶液（生理鹽水配置）至終濃度為20μmo1/L,37℃，5%CO2條件下繼續培養。空白實驗對照加入等體積的生理鹽水，同樣條件繼續培養。24h后進行染色及形態學觀察。（2）胰酶消化細胞，將培養基上清及消化下來的細胞一同轉入離心管中600~800r/min離心10min。（3）吸去上清，用1mLPBS重懸細胞沉淀，并轉入1.5mL微量離心管中，600~800r/min...

微孔濾膜培養小室及雙室聯合培養系統（Transwell實驗）：應用微孔濾膜培養小室，進行膠質瘤細胞與內皮細胞的聯合培養，可以更接近體內環境，模擬瘤細胞對血管內皮細胞的作用，濾膜上8μm的微孔可允許內皮細胞穿過到達膜的下面，這些穿越遷移的內皮細胞可粘附于膜的下面，通過計數濾膜下面的細胞可基本反映細胞的遷移情況。Transwell的基本原理是將Transwell小室放入培養板中，小室內稱為上室，培養板內稱為下室，上室內添加上層培養液，下室內添加下層培養液，上下層培養液以膜相隔。將...

一、實驗原理各種細胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導致細胞死亡。為了確定群體細胞中的存活細胞數，可采用臺盼藍染料排斥實驗（Phillips1973)。正常的健康細胞能排斥染料，但細胞膜完整性喪失后臺盼藍可彌散入細胞內。染料排斥實驗是一種粗糙的估計細胞活力的方法，無法區別10%~20%的活力差異。除此之外，排斥染料的細胞有可能不貼壁或不能較長時問生存或繁殖。二、實驗方法1)胰蛋白酶處理細胞，無菌狀態下取0.5ml細胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向...

一、細胞轉染細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染兩大類。本實驗室主要是質粒轉染、miRcroRNA轉染、慢病毒轉染、藥物轉染、多肽轉染等。二、miRcroRNA轉染（一）實驗材料及試劑六孔板、CO2培養箱、EP管、酒精燈等；無血清培養基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細胞等。（二）實驗內容1當六孔板中MSC細胞密度達90％時，準備轉染，將無血清培養基、MEM-α或DMEM取出...

流式細胞術檢測細胞周期1。實驗原理用流式細胞儀檢測細胞周期，通常用碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染細胞核。PI在一定波長的光下發出熒光，其強度與DNA含量成正比。通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數，可檢測細胞的增殖、凋亡。2。流式細胞儀檢測A549細胞周期步驟收集對數生長期細胞，計數，以(1~5)×105/孔接種于6孔板，置37℃，5％CO2條件下培養過夜，使細胞貼壁。次日更換培養液，各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶...

1、炎癥灶內主要是巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞浸潤。單核吞噬細胞的浸潤對慢性炎癥十分重要。單核細胞從血管游出后轉化為巨噬細胞。巨噬細胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細胞的積聚有三方面的原因：①由于從炎癥灶不斷產生吸引單核細胞的趨化因子，如C5a、纖維蛋白多肽、陽離子蛋白質及膠原和纖維粘連蛋白的分解產物等。因此，從血液循環中滲出的單核細胞源源不斷來到局部，這是局部巨噬細胞的主要來源。②游出的巨噬細胞在局部通過有絲分裂而增殖，但巨噬細胞局部增殖的起始動因還不清楚。③炎癥灶內的巨噬細胞...